Jajčanin Jozić, Nina (2011) Biochemical and structural characterization of dipeptidyl-peptidase III from yeast Saccharomyces cerevisiae. Doctoral thesis, Sveučilište u Zagrebu, Prirodoslovno-matematički fakultet.
|
PDF
- Published Version
Download (2MB) | Preview |
Abstract
Dipeptidil-peptidaze III (DPP III) su enzimi uključeni u intracelularni katabolizam proteina, a čine zasebnu porodicu cink-metalopeptidaza (M49). Njihov katalitički mehanizam i strukturna svojstva još su nedovoljno istraženi. Sve DPP III inhibirane su tiolnim reagensima. S ciljem doprinosa poznavanju katalitičkih svojstava i prostorne građe metalopeptidaza porodice M49, kloniran je i prekomjerno eksprimiran gen za DPP III kvasca Saccharomyces cerevisiae, a protein pročišćen i biokemijski okarakteriziran. Nadalje, ciljanom mutagenezom pojedinačno je zamijenjeno svih 5 ostataka cisteina, te 7 evolucijski visoko očuvanih aminokiselinskih ostataka. Usporedbom katalitičkih svojstava ''divljeg tipa'' i mutiranih proteina ustanovljeno je da su Cys639 i Cys518 odgovorni za inhibiciju sulfhidrilnim reagensima, a Cys130 za dimerizaciju enzima. U vezanju peptidnog supstrata sudjeluju Glu461, Asp381 i Arg582, dok Tyr327 i His578 doprinose stabilizaciji prijelaznog stanja. Najveći pad katalitičke efikasnosti (kcat/Km), od čak 25 000 puta, uočen je za mutant E461Q, što ukazuje na esencijalnu ulogu Glu461 u katalitičkom mehanizmu. Kroz interdisciplinarnu suradnju, mutant C130S je kristaliziran i razjašnjena mu je 3-D struktura.
| Item Type: | Thesis (Doctoral thesis) | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Uncontrolled Keywords: | dipeptidyl-peptidase III; M49 family; Saccharomyces cerevisiae; reactive cysteine residues; site-directed mutagenesis | ||||||||
| Subjects: | NATURAL SCIENCES > Chemistry NATURAL SCIENCES > Chemistry > Organic Chemistry |
||||||||
| Divisions: | Division of Organic Chemistry and Biochemistry | ||||||||
| Projects: |
|
||||||||
| Depositing User: | Nina Jajčanin Jozić | ||||||||
| Date Deposited: | 07 Oct 2015 13:21 | ||||||||
| URI: | http://fulir.irb.hr/id/eprint/2157 |
Actions (login required)
 |
View Item |
Citations:
Citations:
